Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 用戶指南

——精準靶向犬尿氨酸酶（KYNU）的高效科研工具

一、產品概述

Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 是賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）旗下 Pierce 品牌研發的單克隆抗體，專為檢測和定量犬尿氨酸酶（Kynureninase, KYNU）設計。該抗體通過重組人源 KYNU 抗原免疫新西蘭白兔制備，經抗原親和純化，確保高特異性和低背景信號。

核心參數：

• 貨號：PA542808

• 規格：100 μg（100 μL）

• 種屬來源：Rabbit Monoclonal

• 宿主/亞型：Rabbit IgG

• 純化類型：抗原親和純化

• 保存條件：短期（2-8℃），長期（-20℃），避免反復凍融

• 應用：免疫印跡（WB）、免疫組化（IHC）、免疫熒光（IF）、ELISA

二、技術優勢

1. 高特異性與靈敏度

• WB：1:1000-1:5000 稀釋度下，可檢測 45-50 kDa 人源 KYNU 蛋白。

• IHC：1:50-1:200 稀釋度下，人肝組織細胞質呈強陽性染色。

• IF：0.5-2 μg/mL 濃度下，HeLa 細胞中 KYNU 定位清晰。

• 抗原設計：基于人源 KYNU 重組蛋白（覆蓋氨基酸序列片段），與鼠源（高序列一致性）和大鼠源（高序列一致性）同源蛋白具有交叉反應性。

• 驗證數據：

2. 穩定的質量控制

• 每批次抗體均通過 WB、IHC 和 ELISA 驗證，確保批間一致性。

• 提供 RRID（如適用），支持實驗結果的可重復性驗證。

3. 靈活的應用場景

• WB：適用于檢測內源性或過表達 KYNU 蛋白。

• IHC：適用于石蠟切片或冰凍切片，可結合 DAB 或熒光底物顯色。

• IF：適用于活細胞或固定細胞，可與其他細胞器標記物共定位分析。

三、操作指南

（一）實驗前準備

1. 試劑與耗材

• 抗體：Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL

• 封閉液：5% BSA 或 10% 脫脂奶粉（PBST 配制）

• 一抗稀釋液：PBST + 0.1% Tween-20

• 二抗：根據實驗選擇 HRP 或熒光標記抗兔 IgG

2. 樣本準備

• WB：細胞裂解液（含蛋白酶抑制劑）或組織勻漿液，蛋白濃度 1-5 μg/μL。

• IHC：石蠟切片脫蠟至水，或冰凍切片固定。

• IF：多聚甲醛固定細胞，0.1% Triton X-100 透化。

（二）實驗操作

1. WB

• 電泳：8-12% SDS-PAGE，上樣 20-50 μg 蛋白。

• 轉膜：PVDF 膜，200 mA 恒流轉膜 90 分鐘。

• 封閉：5% BSA，室溫孵育 1 小時。

• 一抗孵育：PA542808 抗體（1:2000 稀釋），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:5000 稀釋），室溫 1 小時。

• 顯色：ECL 底物，化學發光成像。

2. IHC

• 抗原修復：檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）高壓修復 10 分鐘。

• 封閉：10% 羊血清，室溫 30 分鐘。

• 一抗孵育：PA542808 抗體（1:100 稀釋），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:200 稀釋），室溫 30 分鐘。

• 顯色：DAB 底物，蘇木精復染。

3. IF

• 封閉：10% 羊血清，室溫 1 小時。

• 一抗孵育：PA542808 抗體（1 μg/mL），4℃ 過夜。

• 二抗孵育：Alexa Fluor 488 標記抗兔 IgG（1:500 稀釋），室溫 1 小時。

• 核染色：DAPI（1 μg/mL），室溫 5 分鐘。

（三）實驗后分析

• WB：使用 ImageJ 或 AlphaView 軟件定量條帶灰度值。

• IHC：通過 ImageJ 或 Halo 軟件分析陽性細胞比例。

• IF：使用共聚焦顯微鏡采集圖像，分析共定位系數。

四、使用技巧與高效操作

1. 抗體稀釋優化

• 建議從 1:1000 開始梯度稀釋，根據實驗結果調整。

• 避免重復凍融，分裝后保存。

2. 內參選擇

• WB：推薦使用 GAPDH 或 β-Actin 作為內參。

• IHC：可結合 DAPI 染色評估細胞核完整性。

3. 對照設置

• 陽性對照：已知表達 KYNU 的細胞系（如 HepG2、HeLa）。

• 陰性對照：省略一抗或使用同型對照抗體。

五、注意事項

1. 安全規范

• 抗體僅供科研使用，不可用于人體或動物實驗。

• 操作時佩戴手套，避免直接接觸。

2. 操作細節

• WB：轉膜后需用麗春紅染色確認轉膜效率。

• IHC：抗原修復后需充分冷卻至室溫，避免非特異性結合。

• IF：透化時間需根據細胞類型優化，避免過度透化。

3. 故障排除

• 高背景：增加封閉時間或提高抗體稀釋度。

• 無信號：檢查一抗保存條件，或延長孵育時間。